L-組氨酸（HIS）是一種氨基酸，參與人體的各種生物學(xué)機制。研究表明，由于其金屬螯合特性，HIS負責(zé)血紅蛋白和肌紅蛋白分子中鐵的結(jié)合，還負責(zé)清除活性氧和氮來源產(chǎn)生的自由基 。作為營養(yǎng)補充劑，它對治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和貧血很有價值，尤其是對慢性腎衰竭患者。人體生物體液中HIS的水平伴隨著營養(yǎng)飲食以及各種疾病，如特應(yīng)性皮炎、組氨酸血癥、過敏等情況發(fā)生變化。

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現(xiàn)行的HIS檢測方法
現(xiàn)行的HIS檢測方法，除流行的反相液相色譜法，離子交換色譜很少使用，但對于分析具有可電離基團的化合物，離子交換色譜是一種極具吸引力的分析技術(shù)。
與反相類似物相比，新型離子交換固定相的穩(wěn)定性具有優(yōu)勢。在 IEC中也可以使用有機溶劑作為流動相，從而拓寬了該技術(shù)在快速性和分離效率方面的應(yīng)用。
但是，IEC 眾所周知的缺點包括平衡時間較長、峰更寬和梯度洗脫受限。在柱后衍生化中，反應(yīng)以“孤立”的形式進行，避免了內(nèi)源性化合物容易發(fā)生副反應(yīng)，從而影響分析方法的準確性及穩(wěn)定性的問題。在分析未知基質(zhì)的復(fù)雜生物樣品時，沒有事先分離的在線衍生化總是容易受到干擾。

因此IEC與柱后衍生儀的結(jié)合已被證明是一種強大的分析工具，它融合了兩種技術(shù)的最佳特性，包括對各種分析物的高分離效率、色譜柱穩(wěn)定性、簡單的樣品預(yù)處理、自動化以及高靈敏度和選擇性。

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Pickering 柱后衍生方案
下述柱后衍生方案基于分析物與OPA在弱堿性介質(zhì)下的特異性在線反應(yīng)，無需親核試劑。通過使用經(jīng)典的基于非特異性O(shè)PA的伯胺化學(xué)方法對人體血清和尿液進行代表性分析，證明了所提出的反應(yīng)在選擇性方面的優(yōu)越特性。

圖1：設(shè)備連接圖示，柱溫箱及柱后衍生部分，可以完美與Pickering onyx PCX適配

圖2:Representative chromatograms from the analysis of human serum by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10), λex/λem = 340/460 nm).

圖3：Representative chromatograms from the analysis of human urine by (A) the proposed HPLC-PCD method and (B) using a non-speciffc PCD reaction (RA = 2 mmol L-1 OPA and RB = 5 mmol L-1 N-acetylcysteine in 100 mmol L-1 borate buffer (pH = 10),

圖4（左圖）:Accuracy of the proposed method. 
圖5（右圖）:Accuracy of the proposed method.
在此案例中鄰苯二甲酸酯（OPA）作為最常用的 PCD 衍生化試劑之一，具有獨特的特性，例如在環(huán)境溫度下反應(yīng)動力學(xué)快、試劑成本低、背景信號相對較低等。與氨基酸（包括組氨酸）的“經(jīng)典”O(jiān)PA 反應(yīng)涉及伯氨基與 OPA 在堿性條件下（通常為 pH 10）在親核試劑存在下反應(yīng)，產(chǎn)生高熒光衍生物 。

然而，在常見的氨基酸中，在沒有親核試劑的情況下，HIS也通過不同的機制與OPA反應(yīng)。HIS -柱后衍生的方法有望成為開發(fā)高度特異性分析平臺的基礎(chǔ)，用于測定復(fù)雜生物材料中的 HIS及其他氨基酸。

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完整方案獲取

Pickering柱后衍生儀可完美適配HPLC、UPLC、IEC等色譜設(shè)備方法，與任何品牌的任何設(shè)備均可聯(lián)用，且可提供具有參考價值的應(yīng)用文獻，衍生試劑，色譜柱等一系列耗材作為輔助，加速方法開發(fā)進程，且結(jié)果準確可靠；

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參考文獻：
Determination of histidine in human serum and urine by cation exchange chromatography coupled to selective on-line post column derivatization，Eirini Stampina a , Apostolia Tsiasioti a , Kalliopi Klimatsaki b , Constantinos K. Zacharis c , Paraskevas D. Tzanavaras a, Journal of Chromatography B，1173 (2021) 122697
Pickering
Pickering是德祥集團資深合作伙伴之一。美國Pickering Laboratories公司是一家全球?qū)I(yè)提供人工測試體液和柱后衍生化學(xué)試劑、色譜柱、分析方法等柱后衍生分析整體解決方案的機構(gòu)，其不斷創(chuàng)新及良好的信譽被眾多的美國政府機構(gòu)如EPA、ATF、FDA、AOAC和世界著名的廠商所認可。

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